E14Tg2a

=**Nombre de la línea celular. Tejido y organismo de origen**=

La línea celular **E14TG2a** fue aislada in vitro como una línea resistente a la 6-thioguanina a partir de la estirpe silvestre E14. Esta sublínea proviene de células troncales embrionarias extraídas de blastocistos de ratón de la especie //Mus musculus// cepa 129/Ola. 

=**Recuadro histórico**=


 * ====**Descubridor**==== || M. Hooper ||
 * ====**Fecha descubrimiento**==== || 1987 ||
 * ====**Depositor**==== || T. Doestchman ||
 * ====**Fecha de deposición**==== || 1988 ||
 * ====**Organismo de origen**==== || //Mus musculus// ||

=**Caracterización de la línea** =

Las células de la línea celular **E14TG2a**, son células troncales pluripotentes embrionarias de ratón. Estas contienen, al igual que la línea E14 (de la cual provienen), 20 pares de cromosomas. Este número se corresponde con el número normal de cromosomas de la especie //Mus musculus//. Cariotipo.

Las células de la línea ** E14TG2a **son deficientes en HPRT y resistentes a 0,06mm 6-tioguanina. La deficiencia en HPRT es el resultado de una delección que eliminó el extremo 5'del gen y secuencias aguas arriba.

 Se trata de una monocapa adherente de células esferoideas en una feeder layer de fibroblastos embrionarios de ratón tratadas con mitomicina C para prevenir la diferenciación celular. Las células se diferencian de forma espontánea formando estructuras embrionarias en ausencia de feeder layer.

=Requerimientos para su mantenimiento=

**Medio de cultivo **  Como medio básico se utiliza DMEM + 10% de suero bovino fetal + Glutamina. Como antioxidante biológico se utiliza 2-Mercaptoethanol. Para mantener las células indiferenciadas se utiliza LIF (Leukemia inhibitory factor).

  **Condiciones de cultivo **  -__Temperatura:__ 37ºC.  -__Atmósfera :__ 95% aire y 5% de CO 2.

  **Subcultivo** <span style="background-color: transparent; color: #212121; font-family: Calibri; font-size: 14.6667px; vertical-align: baseline;"> Se debe retirar el medio, agregar tripsina al 0.25% con solución EDTA 0,53 mM. Dejar actuar la tripsina para aflojar las células, retirar y añadir medio fresco. Dispersar en nuevos frascos que contienen feeder layer tratada con mitomicina-C.

<span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Calibri; font-size: 14.6667px; vertical-align: baseline;"> <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Calibri; font-size: 14.6667px; vertical-align: baseline;"> ** Criopreservación ** <span style="background-color: transparent; color: #212121; font-family: Calibri; font-size: 14.6667px; vertical-align: baseline;"> -__medio de congelación:__ 95% de medio completo de cultivo y 5% de DMSO. <span style="background-color: transparent; color: #212121; font-family: Calibri; font-size: 14.6667px; vertical-align: baseline;"> -__temperatura de almacenamiento:__ vapor de nitrógeno líquido.

<span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Calibri; font-size: 14.6667px; vertical-align: baseline;"> Hasta ahora se mantenían las células en condiciones óptimas en cultivo sobre una feeder layer de fibroblastos. Ya han aparecido estudios recientes en los que se ha conseguido su cultivo en un suero sintético en ausencia de feeder layer, esto reduce el tiempo requerido para el cultivo.

=Principales usos en investigación.=

<span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Calibri; font-size: 14.6667px; vertical-align: baseline;">Actualmente, el conocimiento adquirido acerca de las células troncales embrionarias de ratón (ES), como sus transcriptomas, la epigenética y las redes reguladoras de genes subyacentes, han hecho posible la comprensión de la pluripotencia y la transición a la diferenciación. A raíz de estos conocimientos, este tipo de células empiezan a usarse de diversas formas en diferentes tipos de investigaciones. <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Calibri; font-size: 14.6667px; vertical-align: baseline;"> Las células de esta línea pueden colonizar la línea germinal de ratones quimera cuando se inyectan en blastocistos, por lo que se pueden usar para obtener ratones transgénicos. <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Calibri; font-size: 14.6667px; vertical-align: baseline;"> Esta línea celular se emplea para comprar la eficiencia de distintas técnicas empleadas en investigación. Un ejemplo de esto, es el estudio realizado sobre las diferencias de la eficacia en mutagénisis dirigida mediante lipofección o electroporación. <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Calibri; font-size: 14.6667px; vertical-align: baseline;"> En general este tipo de células son importantes para la elaboración de diversos modelos biológicos para el estudio de enfermedades humanas, para desarrollos biotecnológicos, biología del desarrollo y medicina regenerativa.

=Descubrimientos científicos más importantes.=


 * Se ha demostrado que la técnica de lipofección es un método de transfección tres veces más eficiente con respecto a la electroporación, lo cual indica que es una técnica alternativa, menos costosa para obtener mutagénesis dirigida en células troncoembrionarias de ratón.
 * Se han aportado pruebas de que la diferenciación neuronal implica un cambio de la oxidación de metabolismo fermentativo, y que la fosforilación oxidativa no es esencial para este proceso.
 * La importancia de HHEX (genes homeobox) como regulador del desarrollo hematopoyético y necesario para la maduración y la proliferación de los progenitores hematopoyéticos tempranos definitivas.

=Referencias=

<span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Calibri; font-size: 14.6667px; vertical-align: baseline;">