S180

La línea celular S180 procede de fibroblastos extraídos de un sarcoma de //Mus musculus// (ratón común). Los fibroblastos son las células más comunes del tejido conjuntivo. Su función es formar la matriz extracelular mediante la secreción de distintos componentes y la remodelación tisular en el caso de heridas o daños. Un fibroblasto es una célula grande, aplanada,con una serie de prolongaciones citoplasmáticas y con un núcleo redondeado. Si los fibroblastos sufren alteraciones en el control de su ciclo celular y comienzan a dividirse de forma descontrolada originando masas celulares hablamos de sarcoma. Por tanto, las células S180 son fibroblastos procedentes de un tumor y sus funciones y propiedades variarán de las de los fibroblastos normales (Figura 1), tal y como explicamos en los siguientes apartados.  **Figura 1**. Fibroblastos de tejido conjuntivo de ratón embrionario. En la imagen de la izquierda, observamos el fibroblasto completo mediante microscopía de contraste de fases. En la imagen de la derecha, observamos los filamentos de actina teñidos con un péptido llamado Faloidina unida a una proteína verde fluorescente. Los filamentos de actina predominan en las prolongaciones celulares de los fibroblastos. La línea celular fue descubierta en junio de 1955 por GE. Foley a partir de fibroblasto presente en el sarcoma de un ratón adulto. El cultivo primario obtenido a partir del sarcoma no representa al tipo celular que estableció la línea S180. GE Foley posteriormente trabajó con diferentes estirpes de las células S180 y seleccionó una cepa (CCFR-S1801) que perdió su capacidad tumorgénica en ratones CFW. Es esta cepa la que constituiría finalmente la línea celular S180 con la que se trabaja actualmente.
 * 1. Línea celular: S180 **
 * 2. Historia de la línea **

Respecto a la morfología, que mantiene también cuando es cancerígena, se trata de un fribroblasto. En cuanto a las características generales de la línea, es importante saber que la estimulación antigénica repetida con una variante nutricional de S180 (CCRF-I), protege a los ratones cuando son infectados con una línea más virulenta del mismo tumor (TUC-S180) En cuanto a las características metabólicas, diferenciando las variedades de la línea celular, la variedad CCRF-I no requiere adición de triptófano para crecer en cultivo, mientras que la cepa TUC-S180, para crecer in-vitro sí lo necesita.
 * 3. Caracterización de la línea **

La línea celular S180 detenta una severa deficiencia en las uniones gap. El problema no reside en la expresión de la conexina 43, sino en su forma fosforilada P2, necesaria para el ensamblaje y función de la misma. Tras la tranfección de S180 con un cDNA, que codifica la adhesión intracelular L-CAM 1, la comunicación de uniones gap y los defectos en la fosforilación de la conexina 43 fueron corregidos. Esto indica la existencia de un vacío entre la adhesión específica de célula a célula, y descarta una posible mutación en el gen que codifica dicha proteína.

Para el crecimiento óptimo de esta línea celular, hemos de aplicar el medio mínimo esencial de Eagle (EMEM) con una serie de aditivos: Renovación del medio. Debemos cambiar el medio dos veces por semana, mediante la eliminación del medio, adición de tripsina al 0,25% durante 2 o 5 minutos, su eliminación y la adición de nuevo medio.
 * 4. Requerimientos para su mantenimiento **
 * Aminoácidos (95%), excepto los esenciales (Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Thr, Trp,Val, His y Arg).
 * Earle´s Balanced salt solution (EBSS). Solución tampón. Mantiene el pH fisiológico y concentración salina isotónica.
 * Suero bovino fetal (5%).

La importancia de la línea celular S180 radica en su aplicación para el estudio y descubrimiento de sustancias anticancerígena. Podemos empezar por la investigación en la que se utiliza un compuesto denominado Wogonin. Este compuesto sirve para disminuir los niveles de mRNA y proteínas BCL-2 (bloqueo de muerte celular) y aumentar su regulador apoptótico BAX, así como los de P53, pudiendo inducir así la apoptosis e inhibiendo el crecimiento del tumor tanto in-vivo como in-vitro.
 * 5. Aplicaciones en investigación **

Se trata de una de las líneas celulares más utilizadas en investigación in vivo relacionada con agentes anti-tumorales.Una investigación in vivo realizada con ratones con células tumorales de Sarcoma 180 fue el estudio del efecto de la actividad anti-tumoral de Physalin B y Physalin D (esteroides aislados de partes aéreas de una planta herbácea perteneciente a la familia de las solanáceas, //Physalis angulata//) Estos compuestos produjeron la inhibición de la proliferación del tumor ya que el marcador Ki67 (velocidad de proliferación de un tumor) se redujo en los animales tratados.

Otro estudio realizado fue con Piplartine y Piperine, amidas alcaloides aisladas de Piper. Se examinó la actividad anti-tumoral en ratones con trasplante de Sarcoma 180, y se analizaron histopatológicamente y morfológicamente en el tumor y órganos incluyendo hígado, bazo y riñón y evaluar la toxicidad del tratamiento. Con ambas se observa reducción del peso del tumor, por lo que presentan actividad tumoral relacionada con daños reversibles que se produjeron en el hígado y riñón.

Se han utilizado también como efecto anticancerígeno bacterias acidolácticas (BAL), como //Lactococcus lactis// subs cremoris KV520, inyectando un liofilizado a los ratones con Sarcoma 180, resultando una inhibición del tumor. Sin embargo “in vitro” no se produjo citotoxicidad en contra de las células del tumor, lo que sugiere que el efecto de la especie en la prevención de la proliferación del tumor viene mediada por la actividad inmune.

En cuanto a esta línea celular, es importante saber que, en la actualidad, se está estudiando como método inductor de apoptosis en células tumorales. De hecho, se pretende usar la molécula benzyl Nω-nitro-Nα-(9H-pyridoij3,4-b]indole-3-carbonyl)-L-argininate (NRCB) unida a la P-selectina (obtenida del sérum de S180) como nuevo inductor de apoptosis a nanoescala. Este hallazgo resulta importante como método alternativo a la quimioterapia, y abre nuevos frentes en la lucha contra el cáncer.

**6. Descubrimientos científicos** El doctor Zheng Cui realizó uno de los descubrimientos más asombrosos de esta línea. Se dedicaba a estudiar el metabolismo de las grasas y, para ello necesitaba anticuerpos, que obtenía provocando la producción de ascitis en ratones. Ninguno de los ratones a los que inyectaba varios miles de células sobrevivía más de un mes. Pero, un día, uno de ellos no tenía síntomas de ascitis. Creyendo que había sido un olvido a la hora de inyectarlo, repitió la inyección duplicando la dosis, aunque tampoco sirvió. La última inyección probada fue de 200 millones de células S180 (mil veces más de lo habitual), en vano.  De modo que empezó a sospechar que se había encontrado con un ratón naturalmente resistente <span style="background-attachment: initial; background-clip: initial; background-image: initial; background-origin: initial; background-position: initial; background-repeat: initial; background-size: initial; display: block; margin: 0cm 0cm 0.0001pt; outline: 0px; text-align: justify; vertical-align: baseline;"> al cáncer. La primera medida fue conservar su genotipo teniendo crías con una hembra vulnerable al cáncer, y la mitad de sus nietos heredaron su misma resistencia a las células S180.  En un momento dado, Zheng Cui se ausentó de su laboratorio durante 7 meses y, a la vuelta, después de la inyección, observó que a todos los ratones les había aparecido una ascitis cancerosa. No supo qué había pasado. Sin embargo, a las 4 semanas fue a verlos y sorprendentemente los ratones estaban vivos y sin rastro de ascitis.   **Figura 2**. Ratón resistente al cáncer <span style="background-attachment: initial; background-clip: initial; background-image: initial; background-origin: initial; background-position: initial; background-repeat: initial; background-size: initial; display: block; margin: 0cm 0cm 11.25pt; text-align: justify; vertical-align: baseline;"> <span style="background-attachment: initial; background-clip: initial; background-image: initial; background-origin: initial; background-position: initial; background-repeat: initial; background-size: initial; display: block; margin: 0cm 0cm 11.25pt; text-align: justify; vertical-align: baseline;"> Tras varios días de experimentos emergió la explicación. El mecanismo de resistencia se debilitaba a determinada edad. Al principio empezaba a desarrollarse el cáncer, lo que explicaba la ascitis, pero a las dos semanas aproximadamente la presencia del tumor activaba la resistencia del organismo y el tumor desapareció por completo. No obstante no se entendían los mecanismos que posibilitaban esta reabsorción. Fue el doctor Mark S. Miller quien lo aclaró. En vez de las habituales células cancerosas esféricas, peludas y agresivas lo que vio fueron células lisas, abolladas y llenas de agujeros, y es debido a que se encontraban en un combate con los glóbulos blancos y las NK del sistema inmunitario. Por lo que los ratones resistentes eran capaces de organizar una poderosa defensa gracias a sus sistema inmunológico.


 * Figura 3**. Célula cancerosa del abdomen de ratón vulnerable a cáncer




 * Figura** 4. Células cancerosas del abdomen de ratón resistente al cáncer. Siendo atacadas por células NK del sistema inmunológico 


 * <span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">7. Referencias **
 * <span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">7. Referencias **

<span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;"> <span style="display: block; height: 1px; left: 0px; overflow: hidden; position: absolute; top: 1180.5px; width: 1px;"> <span style="background-attachment: initial; background-clip: initial; background-image: initial; background-origin: initial; background-position: initial; background-repeat: initial; background-size: initial; color: #1d1d1d; margin: 0cm 0cm 11.25pt; text-align: justify; vertical-align: baseline;">El doctor Zheng Cui se dedicaba a estudiar el metabolismo de las grasas y, para ello necesitaba anticuerpos, que obtenía provocando la producción de ascitis en ratones. Ninguno de los ratones a los que inyectaba varios miles de células sobrevivía más de un mes. Pero, un día, uno de ellos (el número 6) no tenía síntomas de ascitis. Creyendo que había sido un olvido a la hora de inyectarlo, repitió la inyección duplicando la dosis, aunque tampoco sirvió. La última inyección probada fue de 200 millones de células S180 (mil veces más de lo habitual), en vano. <span style="background-attachment: initial; background-clip: initial; background-image: initial; background-origin: initial; background-position: initial; background-repeat: initial; background-size: initial; margin: 0cm 0cm 0.0001pt; outline: 0px; text-align: justify; vertical-align: baseline;"> De modo que empezó a sospechar que se había encontrado con un ratón naturalmente resistente al cáncer (Cui //<span style="border: 1pt none windowtext; color: #1d1d1d; font-size: 10.5pt; font-weight: inherit; outline: 0px; padding: 0cm;">et al // ., 2003). <span style="background-attachment: initial; background-clip: initial; background-image: initial; background-origin: initial; background-position: initial; background-repeat: initial; background-size: initial; color: #1d1d1d; margin: 0cm 0cm 11.25pt; outline: 0px; text-align: justify; vertical-align: baseline;">La primera medida fue conservar su genotipo teniendo crías con una hembra vulnerable al cáncer, y la mitad de sus nietos heredaron su misma resistencia a las células S180.

En un momento dado, Zheng Cui se ausentó de su laboratorio durante 7 meses y, a la vuelta, después de la inyección, observó que a todos los ratones les había aparecido una ascitis cancerosa. No supo qué había pasado. Sin embargo, a las 4 semanas fue a verlos y sorprendentemente los ratones estaban vivos y sin rastro de ascitis. <span style="background-attachment: initial; background-clip: initial; background-image: initial; background-origin: initial; background-position: initial; background-repeat: initial; background-size: initial; color: #1d1d1d; margin: 0cm 0cm 11.25pt; text-align: justify; vertical-align: baseline;">Tras varios días de experimentos emergió la explicación. El mecanismo de resistencia se debilitaba a determinada edad. Al principio empezaba a desarrollarse el cáncer, lo que explicaba la ascitis, pero a las dos semanas aproximadamente la presencia del tumor activaba la resistencia del organismo y el tumor desapareció por completo. No obstante no se entendían los mecanismos que posibilitaban esta reabsorción. Fue el doctor Mark S. Miller quien lo aclaró. En vez de las habituales células cancerosas esféricas, peludas y agresivas lo que vio fueron células lisas, abolladas y llenas de agujeros, y es debido a que se encontraban en un combate con los glóbulos blancos y las NK del sistema inmunitario. Por lo que los ratones resistentes eran capaces de organizar una poderosa defensa gracias a sus sistema inmunológico