C1300

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La línea celular C1300 deriva de un neuroblastoma que da origen a un cáncer embrionario de cresta neural. El neuroblastoma proviene, más concretamente, de las células primitivas que se encuentran en el sistema nervioso simpático. El tumor extracraneal se puede encontrar más frecuentemente en los primeros años de vida, y su predisposición a padecer el tumor se haya en el brazo corto del cromosoma 16. Fueron aisladas por primera vez desde ratas presentando una morfología neuronal. toc

Breve recuerdo histórico
 En 1940 fue descrita por primera vez la línea celular C1300. Se aisló de la médula espinal de un ratón albino A/J, encontrándose en la cadena A de la misma,. R.J.Klebe fue el depositor de esta línea celular obtenida de Jackson Laboratory Memorial, Bar Harbor, Maine. Jackson Labs (Bar Harbor, Maine) ha conseguido clones de esta línea, este clon en humanos se denomina TNJ-NB. La diferencia más caracterísica entre este clon y la línea C1300, es que la primera es metastásica, ya que posee una banda de 94 kDa que le aporta esta característica, mientras que la línea original no posee esta característica. Las células del tumor se han mantenido gracias a la transferencia subcutánea en serie en ratones A/J, mediante la dispersión de las células en Jackson Memorial Laboratory. En 1967, Klebe y Ruddle consiguieron adaptar esta línea celular las condiciones de cultivo tisular y comenzaron a llamarla “Neuro”. Se han producido numerosos clones de esta línea celular, pero podríamos destacar uno. Este clon, o sublínea celular se denomina N1E-115. N1E-115 ha sido un objeto de estudio importante, ya que por sus características hacen que este clon sea un modelo para el estudio del mecanismo de regulación de la tirosina hidroxilasa.

Durante varios años las células del neuroblastoma de ratón han servido para el estudio de parámetros morfológicos y bioquímicos, proporcionando información sobre la diferenciación neuronal y las neoplasias.

Caracterización de la línea
Esta línea celular se caracteriza por tener una morfología redondeada, tanto en el tumor subcutáneo como en el medio de cultivo. Comienzan con una morfología celular redondeada en el tejido subcutáneo y en el cultivo en suspensión, pero cuando se produce la adhesión al cultivo se induce un cambio morfológico de célula redondeada anaplásica a célula con propiedades de una neurona madura. Gracias a la microscopia electrónica podemos conocer que las células contienen neurofilamentos, neurotúbulos y vesículas con un núcleo denso típicas de las fibras nerviosas. Encontramos diferencias en la morfología y características de la línea celular, según crezcan in vivo o in vitro.
 * Características in vivo. Las células presentan una forma ovalada, no siguen un patrón claro ni están muy unidas entre si. La mayoría de las células son uninucleadas y es difícil encontrar células multinucleadas.
 * Características in vitro. Podemos encontrar células creciendo en suspensión o en agregados. Las células en suspensión suelen tener entre 3 y 4 núcleos y tiene forma redondeada al igual que in vivo. El crecimiento en el cultivo presenta una población homogénea de células que contiene interdigitaciones no especializadas y un sistema difuso formado por el retículo endoplasmático y partículas víricas. Además encontramos dos formar morfológicas de mitocondrias, una población con una forma normal y otras más voluminosas. Las células en crecimiento tienden a formar agregados. Las células que forman estos agregados presentan un mayor tamaño y un mayor número de núcleos, generalmente son octaploides. En este caso el retículo endoplasmático es compacto y no hay presencia de virus, aunque a veces se pueden encontrar virus maduros en el citoplasma.

Requerimientos para su mantenimiento.
Se pueden encontrar diferentes formas de cultivo para esta línea celular:
 * Las células procedentes del neuroblastoma C1300 se ponen en un medio Eagle modificado de Dulbecco, en ausencia de rojo de fenol, pero suplementado con suero de ternera fetal al 10% junto con L-glutamina 2mM. El cultivo de dichas células se realiza a 37ºC en presencia de una atmósfera humidificada con un 5% de CO2 en el aire. Posteriormente las células se subcultivan en placas de cultivo de 35 mm.
 * Las células se colocan en un medio Eagle constituido por un 20% de suero de ternera fetal. Los cultivos se mantienen a 37ºC en una incubadora con un 85% de aire y un 15% de CO2. Cuando el cultivo se realiza en placas Petri, la línea celular establecida consta de un tiempo de duplicación de 17 horas.

Principales usos en investigación o clínica
La línea celular C1300 ha sido caracterizada biológica y bioquímicamente como un modelo in vivo de un tumor de la cresta neural para los estudios farmacológicos. Durante los primeros años desde su establecimiento como línea ha sido utilizada para comprender los patrones de crecimiento del neuroblastoma, cómo produce metástasis, mecanismos bioquímicos y secreción de moléculas. Junto al uso experimental de neuroblastomas humanos, la línea C1300 se ha usado para evaluar la efectividad de la quimioterapia y la radioterapia, para los cuales se medía la tasa de crecimiento del tumor y el tiempo de supervivencia del animal de experimentación. La combinación de células dendríticas activadas por el virus Sendai con la radiación gamma produce una inmunidad duradera protectora, evitando la metástasis de las células C1300 del neuroblastoma. Uno de los usos más importantes de esta línea celular ha sido su papel como modelo de estudio de la respuesta inmunitaria específica en el control de tumores mediante un sistema tumor-huésped C1300-A/JAX. Esto ha permitido la investigación de la supervivencia inmunológica a tumores del sistema nervioso en células humanas. Se utilizaron para el descubrimiento de la actividad antiapoptótica del transcrito asociado a latencia (LAT) del herpes simplex virus tipo I, que protege a las células del neuroblastoma infectadas de forma latente de los ataques de los linfocitos T citotóxicos CD8+.

Descubrimientos científicos más importantes
La línea celular C1300 del neuroblastoma se ha empleado para observar si la talidomida elimina la activación de NF-κB inducida mediante etopósido, de manera que potencie la apoptosis en el neuroblastoma. También se ha descubierto que el daño en el DNA promueve la expresión de la proteína del virus del herpes simple-1. El neuroblastoma infectado por el virus por si solo no es capaz de inducir daño en el DNA, pero junto con los tratamientos farmacológicos se facilita la inducción del promotor viral y con ello la expresión de la proteína viral. De manera que se demostró que los genes virales del herpes simple-1 cuando están en estado latente pueden producir infección si sufren un daño del DNA. Se ha estudiado los efectos que tiene la testosterona en la diferenciación y resistencia al estrés oxidativo debido a sus propiedades antioxidantes que tiene gran interés en la terapia a nivel experimental de enfermedades neuropatológicas. Por medio de la generación de un transfectante a partir del neuroblastoma C1300 se producen altos niveles de osteopontina que interviene en el proceso de la angiogénesis.