WI-38

=** WI-38 **= La línea celular WI-38 se corresponde con unas células diploides humanas (fibroblastos) derivadas de un tejido embrionario pulmonar sano de un feto. toc

__ Breve recuerdo histórico __
La línea celular WI-38 fue establecida por L. Hayflick y P. Moorhead en 1961, en el Instituto Wistar de Filadelfia. Esta línea celular proviene de un aborto legal en Suecia de tejido pulmonar sano de un feto de 4 meses de gestación el cual era una hembra y fue enviada a dicho Instituto. Hasta el momento, el Dr. Hayflick buscaba células normales/no cancerosas (no como las de la línea HeLa) para determinar si los virus podían formar cáncer en humanos. Puesto que estas células eran normales, Hayflick estableció esta nueva línea, WI-38, que se convertiría hasta día de hoy, en la línea celular más ampliamente descrita, estudiada y utilizada.

Las células WI-38 se caracterizan por ser de cariotipo diploide y tienen una vida útil finita de 50 duplicaciones de su población con un tiempo de doblaje (D T ) de 24 horas aproximadamente. Estas células son pequeñas, con bordes claros y continuos, fusiformes con núcleo ovalado. En cuanto a **mutaciones**, destacamos:
 * ¿Qué forma presentan estas células? **
 * **__Desactivación de DLK por infección con vectores lentivirales (Sh-hDLK2) que mostraron un menor ratio de proliferación__**: Regula la mitosis en respuesta a la estimulación sérica; con lo que al cesar la proliferación se acumulan las células en fase G1 del ciclo celular (sin pasar a la fase S), se reducen los niveles de ciclina D1, adoptando las células un fenotipo senescente por la expresión aumentada de p53 and p21. Además inactivan a ERK (MAPK/ERK pathway), que regulan el comportamiento de la célula en respuesta a estímulos o moléculas, regulando la expresión de genes en el núcleo.
 *  **__Transducción con diferentes combinaciones de construcciones retrovirales, adoptan el fenotipo clave de las células tumorales, como el aumento de vida y crecer en agar blando__**: Poblaciones que presentabanhTERT + T/t-Ag y hTERT + T/ t-Ag + H-Ras fueron las que superaron el número de PDs (Population doublings), donde normalmente ocurre la senescencia en estas células (inmortalizazdas). Adoptan características neoplásicas, como ratio nuclear/citoplásmico alto, grandes núcleos pleomórficos que demuestran la cromatina moteada, nucleolo prominente, y figuras mitóticas frecuentes. También se observó una acidificación del medio; y además las células exhibían pérdida de inhibición de contacto y focos formados in vitro. Los oncogenes fueron T/t-Ag and H-rasV12 con la expresión exógena de hTERT. El experimento confirmó que la actividad de la telomerasa y la elongación de los telómeros incrementan el nivel de vida normal de esta línea celular.
 * **__Sobreexpresión deMsrA protege a los fibroblastos de la muerte frente al tratamiento con H2O2__**: En general, esta enzima reduce en el contenido intracelular las especies totales ROS, y disminuye el daño oxidativo que sufrirían las proteínas. Son transformadas por virus SV40 T antigen (WI-38 SV40) y transfectadas con pCDNA3.1 (þ)/msrA o pCDNA3.1 (þ). Sorprendentemente, los niveles de expresión de Hsp90 disminuyen cuando las células que sobreexpresan MsrA se someten al tratamiento con H2O2; funcionando así como un “bombero” respecto a la maquinaria celular, sin perder el potencial frente al estrés oxidativo. Esta enzima invirtiendo la oxidación de metionina en proteínas, podría estar implicada en la regulación de expresión de proteínas y así como de la actividad de proteínas diana como la Calmodulina. Las proteínas con las que interactúa están implicadas en envejecimiento, defensa contra el estrés oxidativo y la muerte celular.

__**Requerimientos para su mantenimiento**__
Cuando se empezó a cultivar esta línea celular se usaba el medio Earle´s Balance Salt Solution, suplementado con un 10% de suero de ternera, NaHCO3, penicilina y estreptomicina. El pH medio era de 7.3 y se cultivaba a 37ºC. El siguiente medio a usar fue el medio E-MEM (con 2mM L-Glutamina), cuyos suplementos son FBS, aminoácidos no esenciales, Piruvato de Sodio, Streptomicina y Penicilina Actualmente se utiliza el DMEM, que incluye los suplementos: FBS, penicilina, estreptomicina y se cultivaba a 37ºC y 5% CO 2.

==<span style="color: #333333; font-family: arial,helvetica,sans-serif; text-align: justify;">**__ Usos y descubrimientos __** == <span style="color: #333333; display: block; font-family: arial,helvetica,sans-serif; text-align: justify;"> <span style="color: #000000; display: block; font-family: Arial,sans-serif; text-align: justify;"><span style="background-color: transparent; color: #000000; display: block; font-family: Calibri; font-size: 11pt; text-align: justify; vertical-align: baseline;">La transformación de estas células permite hacer estudios para vincular la expresión génica con cambios en el comportamiento celular, además que son ampliamente usadas en estudios de envejecimiento. A su vez, es un potente modelo in vitro con el que se pueden estudiar terapias novedosas dirigidas a vías esenciales en la formación de tumores y en el período posterior en el que se desarrollan, así como el análisis de los mecanismos envueltos en el aumento de la incidencia del cáncer con el envejecimiento. También cabe destacar que es uno de los modelos experimentales clásicos para estudiar el envejecimiento celular y la senescencia.
 * <span style="background-color: transparent; font-family: Calibri; font-size: 11pt; vertical-align: baseline;">¿Para qué se utilizan las células WI-38? ¿Cuáles son sus principales usos? **

<span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Calibri; font-size: 11pt; vertical-align: baseline;">Entre los **descubrimientos** gracias a las células WI-38 destacamos:
 * Los niveles endógenos de ceramida aumentan considerablemente y específicamente comparado con otros lípidos, conforme las células entran en fase de senescencia. Investigaciones en los mecanismos de este aumento, sugieren el descubrimiento de que la actividad neutral esfingomielinasa es elevada en células senescentes.
 * Un sistema de detección total más eficiente que el usado en el New York Virus Watch (VW); combinando células embrionarias de riñón (HEK) y células WI-38 para la detección de multitud de virus; donde se dio con 2 o 3 virus en 31 especímenes. Las WI-38 en especial detectaron rhinovirus, herpesvirus y echovirus.
 * Descubrimiento del análogo 37 a INZ más potenteque INZ en la activación de p53 y en la inhibición del crecimiento celular en multitud de líneas humanas cancerígenas. Este además, tiene menor efecto nulo sobre p53 y no es tóxico en células normales humanas WI-38 que presentan el p53.
 * Descubrimento de la piperlongumina como un potencial ejemplo para el desarrollo de agentes senolíticos, que además de sus muchos efectos farmacológicos, también es tiene actividad antitumoral. Preferentemente mata a fibroblastos senescentes, WI-38.

Cabe destacar que el descubrimiento más importante hasta la fecha ha sido en las vacunas, con ejemplos como:

<span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Calibri; font-size: 11pt; vertical-align: baseline;">La vacuna contra la rubéola fue solo una de muchas hechas usando WI-38. En la década de 1960, se autorizó una vacuna contra el sarampión basada en WI-38 en la antigua Unión Soviética y Koprowski desarrolló una vacuna contra la rabia utilizando las células. A principios de la década de 1970, la compañía farmacéutica Wyeth (ahora parte de Pfizer) lanzó una vacuna de adenovirus oral desarrollada utilizando WI-38 y Pfizer, con sede en Nueva York, usó WI-38 para fabricar una vacuna contra la polio. Hoy en día, las células también son utilizadas por Merck para fabricar vacunas contra la varicela y la infección nerviosa dolorosa.

** __ Videos relacionados __ **
<span style="background-color: transparent; color: #000000; display: block; font-family: Calibri; font-size: 11pt; text-align: justify; vertical-align: baseline;"> media type="youtube" key="Qq7nTaGqjok" height="294" width="402" <span style="color: #000000; display: block; font-family: Arial,sans-serif; text-align: justify;">

<span style="color: #000000; font-family: Arial,sans-serif; text-align: justify;">**__ Referencias bibliográficas __**
<span style="color: #000000; display: block; font-family: Arial,sans-serif; text-align: justify;">