HT-29

=**1. Descripción de HT-29.**=

La línea celular HT-29 proviene de un adenocarcinoma colorrectal humano. Normalmente adquieren un crecimiento de multicapa indiferenciada y no polarizado, aunque se pueden utilizar diversos tratamientos para polarizar y diferenciar dicha línea celular **[1]**. Actualmente existen cuatro tipos descritos de HT-29 (Tabla 1).

//**Tabla 1.** Diferentes variaciones de la línea HT-29.// **[2]**
 * = **Nombre** ||= HT-29 A ||= HT-29 B ||= HT-29 C ||= HT-29 D ||
 * = **Medio de cultivo** ||= SKI ||= SKI ||= ATCC ||= ATCC ||
 * = **Año de congelación** ||= 1967 ||= 1973 ||= 1982 ||= 1984 ||

Cabe destacar la importancia de la sensibilidad a ciertas sustancias quimioterapéuticas como el 5-fluorouracilo, el oxaliplatino y el taxol, sustancias que actualmente se emplean para el tratamiento contra el cáncer colorrectal. Por lo que esta línea celular es modelo de estudios contra el cáncer colorrectal **[3]**.

=**2. Breve recuerdo histórico.**=

La línea celular HT-29 se estableció en el 1964 a partir de un tumor primario de un adenocarcinoma colorrectal de una mujer caucásica de 44 años **[4]** con el grupo sanguíneo A17.

Inicialmente, con esta línea se estudiaron difernetes aspectos de los cánceres en humanos, la importancia de estas células se observa en su capacidad de expresar características de células intestinales maduras como enterocitos o células secretoras de mucus **[5]**. Se cambió la glucosa por la galactosa en el medio de cultivo de células de tipo HT-29 resultante de la diferenciación mediante cultivo celular de células de tipos absorbente (enterocitos). Se vio que su cultivo podía ser posible en ausencia de glucosa, además usando el mismo componente nutricional pero con tratamiento de butirato de sodio tenía un diferenciación igual de elevada. Todas estas adaptaciones han conseguido explicar en cierta forma el origen de esta estirpe celular pero aún no se conocen las causas que hacen posible su crecimiento en diferentes medios de cultivo **[6]**.

**3. Caracterización de la línea.**

A día de hoy, se han descrito cuatro variantes de esta línea celular (Tabla 2) cuya distribución de cromosomas varía desde 54 hasta 72 cromosomas dependiendo de la tipo y la estabilidad cromosómica **[2]**.

//**Tabla 2.** Distribución cromosómica de los diferentes tipos de HT-29.// **[2]** La expresión de oncogenes que se conoce en la línea HT-29 de carcinoma colorectal hasta el momento son: c-myc, H-ras, K-ras, N-ras, myb, fos, sis y p53 **[7]**.Por otro lado, se han hallado 17 marcadores característicos en metafase. Los marcadores genéticos son los siguientes:
 * **Nombre ** || HT-29 A || HT-29 B  || HT-29 C  || HT-29 D  ||
 * **Nº de pases ** || 19 || 125  || 130  || 131  ||
 * **Día descongelado** || 5/85 || 4/85  || 4/85  || 4/85  ||
 * **<span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">Distribución de cromosomas ** ||||  ||   ||   ||
 * **<span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">Rango ** || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">54-62 || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">65-72  || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">68-72  || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">67-72  ||
 * **<span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">Media ** || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">60 || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">70  || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">70  || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">70  ||
 * <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">**Desviación** **típica** || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">1.7 || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">1.6  || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">1.2  || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">1.1  ||
 * **<span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">Número modal ** || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">59 || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">71  || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">71  || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">71  ||
 * ~ M1p-(=t(3p-;?) ||~ M6 ||~ t(13;?)a ||~ 15p+ ||
 * ~ t(7q;?) ||~ ?t(8q;9q-) ||~ t(13;?b ||~ Xq- ||
 * ~ t (10q,?) ||~ ¿Xp ||~ 19q+b ||~  ||
 * ~ i(13q) ||~ M9 ||~ M14 ||~  ||
 * ~ 19q+a ||~ 6q+ ||~ M15 ||~  ||

Además en esta línea celular se pueden encontrar diferentes anomalías cormosómicas, como una nulisomía en el cromosoma 13 e inlcuso a su vez puede presentar monosomías en los cromosomas 8 y 14, tal y como muestran la Figura 1.



//**Figura 1.** Cariotipo procedente de HT-29 A(Izquierda) y cariotipo procedente de HT-29 C (Derecha)// **[2]**. La línea celular HT-29 de adenocarcinoma colorrectal humano posee una morfología epitelial (Figura 2). En condiciones estándar de cultivo, adquieren un crecimiento multicapa indiferenciado y no polarizado, aunque alterando el tratamiento de las células con diversos inductores o cambiando las condiciones estándar de cultivo producen una morfología polarizada y diferenciada, calificada por cambiar la distribución de antígenos en la membrana y por desarrollar un borde en forma de cepillo en la membrana apical **[3]**.



//**Figura 2.** Imagen de una muestra de HT-29 con baja densidad (izquierda) y alta densidad (derecha).// Imagen obtenida de [|ATCC.] **4. Requerimientos para su mantenimiento.**

Se han observado distintos medios de crecimiento en diferentes estudios con células HT-29. Aunque comparten algunas características como las condiciones de cultivos, presentan diferentes complementos. A continuación se detallan algunos de estos medios:

// **Tabla 3.** Requerimientos para el mantenimiento. //** [2] ** // **Tabla 4.** Medios de cultivo empleados para el mantenimiento de las células HT-29. // + aminoácidos no esenciales 1% || Suero fetal bovino defibrinado 10% + GlutaMAX 5% ||  || Suero fetal bovino 10% || Suero fetal bovino inactivado 10% + glutamina 2mM + aminoácidos no esenciales 1% || + 10000 mg/mL Estreptomicina + 25 μg/mL antimicótico Fungizone® ||  || 100 unidades/mL Penicilina y Estreptomicina ||   ||
 * **<span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">Nombre ** || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">HT-29A || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">HT-29B  || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">HT-29C  || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">HT-29D  ||
 * **<span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">Nº de pases ** || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">19 || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">125  || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">130  || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">131  ||
 * <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">**Días descongelado** || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">5/85 || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">4/85  || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">4/85  || <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Verdana; font-size: 9pt; vertical-align: baseline;">4/85  ||
 * **MEDIO DE CULTIVO** || McCoy 5a modificado || DMEM (sin piruvato) || DMEM (con 4.5 g/mL glucosa + 110 mg/mL piruvato) || RPMI-1640 || RPMI-1640 || EMEM ||
 * **COMPLEMENTOS** || Suero fetal bovino 10% || Suero fetal bovino 10%
 * **ANTIBIOTICOS** ||  || 2.5 mg/mL Plasmocina || 10000 unidades/mL Penicilina
 * **CONDICIONES DE CULTIVO** || Humedad relativa 95%; 37 ºC; CO2 al 5% || Humedad relativa 95%; 37 ºC; CO2 al 5% || Humedad relativa 95%; 37 ºC; CO2 al 5% || Humedad relativa 95%; 37 ºC; CO2 al 5% || Humedad relativa 95%; 37 ºC; CO2 al 5% || Humedad relativa 95%; 37 ºC; CO2 al 5% ||
 * **REFERENCIA** || **[8]** || **[9]** || **[10]** || **[11]** || **[12]** || **[13]** ||

**5. Principales usos en investigación o clínica con justificación de sus ventajas frente a otros tipos celulares.**

Uno de los principales usos de la línea celular que nos ocupa es su empleo en la investigación, para la comparación de tratamientos de fármacos para valorar su citotoxicidad. Además de utilizar la línea celular HT-29 como modelo de tumor de xenoinjerto para el cáncer colorrectal estas células se utilizan también para el estudio in-vitro de las características de las células intestinales como son la absorción, el transporte y la secreción **[1]**. La línea celular HT-29 ha sido empleada para la obtención de anticuerpos monoclonales (Mabs), empleados para la caracterización de antígenos asociados a tumores (AAT) y en clínica. En concreto, uno de los Mabs caracterizados ha sido el A1C5 (IgM) que define un AAT de colon **[14]**. Uno de los principales motivos para emplear la línea HT-29 se basa en la elevada capacidad proliferativa que presenta y la capacidad de reflejar la respuesta inflamatoria frente a enfermedades del colon asociadas al cáncer **[15]**.

6. Descubrimientos científicos más importantes obtenidos con esta línea celular.
A continuación se muestran algunas de las diferentes hallazgos y aplicaciones que se ha realizado con la estirpe celular HT-29 dentro del ámbito de la investigación:
 * 1) Descubrimiento de la proteína angiogenina (potente estimulador de la creación de nuevos vasos sanguíneos por el proceso de agiogénesis) a partir de un tumor humano de células de la estirpe HT-29 **[16]**.
 * 2) Estudios relacionado con la señalización de rutas relacionadas con la macroautofagia (rutas degradantes de los lisosomas que inician la síntesis de novo del fagoforo) **[17]**.
 * 3) Investigaciones sobre la síntesis de diferentes tipos de quimioterapeúticos **[17]**.
 * 4) Descubrimientos en la estirpe HT-29 sobre el proceso de metilación del DNA **[18]**.
 * 5) Descubierto de un substituto para MTT (sal internta MTS que en presencia de PMS produce un formazán soluble) para ensayo de screening en microcultivos **[19]**.

7. Enlaces de interés.
Descripción de la línea celular HT-29: media type="youtube" key="j476rNsn3SM" width="560" height="315" align="center"

media type="youtube" key="bg7KajggF_k" width="560" height="315" align="center"

media type="youtube" key="7pCf3e2Gd3A" width="560" height="315" align="center"

1 st International Deuterium Symposium, 13-14 de Mayo del 2010, Budapest. Hungría. Antiproliferative effects, cell cycle alterations and apoptosis induction of DDW on Z47D and HT-29 human carcinoma cell lines por A. Hosseini : media type="youtube" key="vqO0IkMOafg" width="560" height="315" align="center"

media type="youtube" key="uSJCdbwOjhQ" width="560" height="315" 1.Representative time-lapse GCaMP3 fluorescence imaging of control-shRNA HT29 cells treated with TSZ for 8 hours.. Middle, differential interference contrast channel (DIC); Right, Merged two channels

2. Representative time-lapse GCaMP3 fluorescence imaging of TRPM7-sh#1RNA HT29 cells treated with TSZ for 8 hours. Left, GFP channel. Middle, differential interference contrast channel (DIC); Right, Merged two channels.

3. Representative time-lapse GCaMP3 fluorescence imaging of control-shRNA HT29 cells cultured in calcium free DMEM and treated with TSZ for 8 hours. Left, GFP channel; Middle, differential interference contrast channel (DIC); Right, Merged two channels:

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<span style="display: block; height: 1px; left: 0px; overflow: hidden; position: absolute; top: 5314px; width: 1px;"> ===<span style="color: #006699; font-family: Lora,Palatino,Times,Times New Roman,serif; font-size: 1.7rem; font-weight: 400; margin-left: 50px; padding-top: 0px; vertical-align: baseline;">[|Representative time-lapse GCaMP3 fluorescence imaging of control-shRNA HT29 cells treated with TSZ for 8 hours.] === <span style="display: block; font-size: 1.4rem; margin: 0px 0px 0px 50px; padding: 0px; word-wrap: break-word;">Left, GFP channel; Middle, differential interference contrast channel (DIC); Right, Merged two channels.