U937

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1. Nombre de la línea. Tejido y organismo de origen
La línea celular U937 o linfoma monocítico humano proviene de un linfoma histocítico extraído de una efusión pleural humana.

 El organismo de origen es //Homo sapiens//, más concretamente, un varón caucásico de 37 años.Se trata de una línea celular muy útil en la investigación científica.



2. Breve recuerdo histórico
  La línea celular U937 fue establecida en 1974, por los investigadores suecos Kenneth Nilsson y Christer Sundström. Kenneth Nilsson es miembro de la UICC(asociación internacional contra el cáncer) mientras que Christer Sundström cuenta con 312 publicaciones y 12728 citas También se les atribuye el establecimiento de otras líneas celulares como U-698 M y U-715 M.

 Ambos investigadores continúan trabajando en el campo de la inmunología,centrándose en la leucemia, en la Universidad de Upssala,Suecia.Juntos han hecho varias publicaciones y actualmente lo siguen haciendo.

 U937 fué depositada en ECACC y ATCC por H. Koren y R. Sutherland. 

 Las células se extrajeron de un hombre caucásico de 37 años con efusión pleural que presentaba un linfoma generalizado. Aunque los análisis de sangre no mostraban un cuadro leucémico y la biopsia de médula ósea era normal, el enfermo recibió quimioterapia y radioterapia pero su cuerpo no respondió favorablemente al tratamiento, y el tumor creció rápidamente provocándole el fallecimiento 3 meses después del diagnóstico.

3. Caracterización de la línea
 **Morfología:** U937 es una línea celular promonocítica, generalmente CD4+, con morfología característica de linfocitos. Pueden diferenciarse a monocitos y macrófagos usando varios agentes como ácidos retinoicos, 1,25- dihydroxyvitamin D3 y 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate.

 Una de las técnicas de caracterización morfológica más común es la realización de un cariotipo, la línea celular original presentaba el cariotipo de la figura 4.  Las células en cultivo son genéticamente inestables, por lo que aunque la línea celular U937 deriva de un hombre, no se detectó cromosoma Y y el cromosoma X está duplicado, resultando una constitución cromosómica X, +X, -Y. Una vez ordenados y tras la caracterización del cariotipo, se puede realizar el bandeo G (figura 5). Los cromosomas son extendidos y teñidos con Giemsa para diferenciar entre bandas oscuras (con mayor proporción de pares G-C) y bandas claras, con una menor proporción. Con este estudio se valora si la posición del DNA en los cromosomas es la correcta y carece de anormalidades tales como translocaciones o deleciones.

 **Defectos genéticos:** estudios previos han mostrado que el cariotipo es complejo y variable. Por lo general, cuenta con un rango entre 49 y 69 cromosomas y muestra varias anormalidades numéricas y estructurales en los cromosomas 1, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 11, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 21, y 22. Un análisis genético mostró que esta línea presenta una translocación t(10;11)(p13;q14) resultado de la fusión de dos genes, importantes para la naturaleza tumoral de la línea.  Tras análisis de bandeo G, empleando FISH, triplicaciones de los cromosomas 7, 8, 18, 19, 20 y 21; además de una cuadruplicación del cromosoma 15, fueron confirmadas.

4. Requerimientos para su mantenimiento
 La línea celular U937 se mantiene en suspensión en medio mínimo RPMI 1640 suplementado con 2mM L-glutamina, 10% suero bovino fetal (FBS) inactivado por calor, 10 mM de HEPES (ácido sulfónico),, piruvato sódico al 1% 100 mM y Pen/Strep al 1% (100μg/ml streptomicina, 100U/ml penicilina). También es necesario una atmósfera con una concentración de CO2 al 5% a 37ºC y con una concentración celular de 1 x 106 en la muestra. Para la criopreservación de la línea celular se utiliza el medio completo de crecimiento suplementado con DMSO al 5%.

 Por ser células sanguíneas, U937 debe ser cultivada en suspensión, para ello se pueden emplear flask Erlenmeyer al que se sumaría un agitador que mantuviera el cultivo en continua agitación o utilizar un Stirrer flask que cuenta con un sistema propio de agitación. Podemos ver un ejemplo de estas técnicas en los siguientes vídeos.

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<span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Arial; font-size: 14.6667px; vertical-align: baseline;"> media type="youtube" key="3yEyHJPzn3E" width="560" height="315"

<span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Arial; font-size: 14.6667px; vertical-align: baseline;"> Para iniciar un nuevo cultivo de esta línea celular se debe partir de una concentración de 1 x 105 células viables/ml. El cultivo se mantiene añadiendo medio nuevo cada 3-4 días y para el subcultivo se toma una concentración de 1 a 2 x 106 células/mL.

<span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Arial; font-size: 14.6667px; vertical-align: baseline;"> Para descongelar las células, depositarlas en un baño a 37ºC, esterilizar el vial usando etanol al 70%. Después se pasa el medio con las células a un tubo de centrífuga que contenga 9 mL de medio para centrifugar a 125 xg durante 5 minutos, eliminar el sobrenadante y resuspender el pellet con medio nuevo para cultivarlo en un flask T-75 o T-25. Para el transporte de la línea celular utilizar hielo seco y se almacena a -196ºC espuestos al vapor del nitrógeno líquido

5. Principales usos en investigación o clínica
<span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Arial; font-size: 14.6667px; vertical-align: baseline;"> Entre los diversos usos de la línea celular U937 podemos destacar los siguientes: >
 * Estudios de la diferenciación mieloide. Desde 1979 se ha ido demostrando que estas células son capaces de diferenciarse en monocitos terminales al ser inducidas con sobrenadantes de cultivos linfocitarios humanos tratados con TPA, Vitamina D3, Interferón γ, TNF y Ácido Retinoico. Esta línea celular es ampliamente usada para estudiar el ciclo celular y la apoptosis, ya que expresa el antígeno Fas (molécula implicada en la muerte celular programada) y es sensible a TNF (factor de necrosis tumoral) y a anticuerpos.
 * Contribuciones al estudio del cáncer, hematología e inmunología. Dado que son células leucémicas se emplean para el estudio de la neoplasia (formación anormal de tejido) y estudios terapéuticos.
 * Análisis bioquímicos y biológicos de la regulación y diferenciación de mielopoyesis. Dado que U937 es una fuente de células sanguíneas.
 * Estudio de los efectos mediados por citocinas producidas por U937 en otros tipos celulares.
 * Modelo tradicional de líneas celulares monocíticas para el estudio de la función de macrófagos, ya que las líneas actuales requieren un medio de crecimiento acondicionado para células T y el contacto con leucocitos irradiados de la sangre periférica (PBLs) para propagarse.
 * Estudio de la muerte celular programada relacionada con las especies ROS.
 * Importante herramienta en la investigación de mecanismos implicados en la adhesión monocito-endotelio, como la síntesis de colagenasas tipo IV y sus correspondientes inhibidores.
 * Modelo in vitro para la presentación de antígenos de micobacterias restringidos por el complejo mayor de histocompatibilidad de clase I(HLA-I),dado que HLA-I se expresa constitutivamente a altos niveles en las células U937 en ausencia de HLA-II o moléculas CD1.
 * Modelo para el estudio de los efectos tóxicos sobre células tumorales de nanopartículas de plata (Ag NPs), como nuevo tratamiento contra el cáncer. Se emplean U937 como modelo de células tumorales en suspensión.
 * Estudios en replicación vírica, evaluación de antivirales y respuestas inmune ante la infección del Virus del Dengue. Por la capacidad de U937 de diferenciarse en monocitos, macrófagos y células dendríticas, las cuales son consideradas las dianas principales para dicho virus.   Para algunos de estos estudios se emplea U937-DC-SIGN. Esta línea celular se obtuvo a partir de U937 por transducción del gen humano de la proteína DC-SIGN (Dendritic cell-specific intercellular adhesion molecule 3-grabbing non-integrin), un factor de adhesión conocido del virus del Dengue.

6. Descubrimientos científicos más importantes
<span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Arial; font-size: 14.6667px; vertical-align: baseline;"> Como ya hemos visto la línea celular U937 tiene muy diversas aplicaciones, y por ello ha contribuido al avance de la ciencia en numerosos campos de acción, tanto en el desarrollo de nuevas técnicas y materiales, como en el análisis de usos alternativos y de efectos de los mismos. A continuación destacamos algunas de estas aportaciones:
 * <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Arial; font-size: 14.6667px; vertical-align: baseline;">Estudio de la apoptosis en células cancerígenas por la adición de compuestos como el costunólido que podrían abrir nuevos frentes en la lucha contra el cáncer.
 * <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Arial; font-size: 14.6667px; vertical-align: baseline;">Estudio de la citotoxicidad de los compuestos que forman parte del polietileno de alto peso molecular (UHMWPE), material utilizado para la fabricación de prótesis. Permitiendo reducir el riesgo de rechazo y mejorar la calidad de vida de los pacientes.
 * <span style="background-color: transparent; color: #000000; font-family: Arial; font-size: 14.6667px; vertical-align: baseline;">Colaboración en la creación de la base de datos GENECLUSTER que organiza los genes en grupos biológicamente relevantes que sugieren nuevas hipótesis sobre la diferenciación hematopoyética.