C7

=**C7- Hypothalamus epitelial cells**=

El hipotálamo es, junto con el tálamo una de las partes de una estructura cerebral llamado diencéfalo, que se encuentra en el centro del encéfalo, por debajo de la corteza cerebral y por encima del tronco del encéfalo de mamíferos. Es bien conocido que el hipotálamo es una de las estructuras cerebrales con un papel más importante en la regulación de los estados de ánimo, la temperatura corporal, del sueño, de los impulsos sexuales, del hambre y de la sed. Partiendo de que actualmente conocemos muchas de las funciones en las que el hipotálamo está implicado, comprender las propiedades biofísicas y farmacológicas de las lineas celulares hipotalámicas es muy importante para conseguir desarrollar nuevas terapias que presenten menos efectos secundarios y sean más eficientes. La primera descripción de esta línea celular data de septiembre de 1974 por un grupo de investigadores neuroendocrinólogos franceses. Esta información fue publicada en el articulo ‘//’////Establishment of a Clone of Mouse Hypothalamic Neurosecretory Cells Synthesizing Neurophysin and Vasopressin’’//. La fecha de depósito de la línea celular fue en Septiembre de 1974, Paris, Francia, por F. De Vitry. Se utilizó como espécimen o paciente de origen el tejido hipotalámico embrionario de un ratón de aproximadamente 14 días, obtenido después de una transformación con el virus SV40 procedente de simios.

=I- Caracterización de la línea. (Morfología, defectos genéticos o metabólicos)=

Según el análisis cromosómico se determinó que la línea celular C7 tiene un total de 106 ± 5 cromosomas, a diferencia de los 40-120 que suele tener la línea celular original heterogénea. La línea C7 se caracteriza por tener formas multipolares con una o dos prolongaciones terminadas en forma redondeada resplandeciente. Cuando existe una alta densidad celular, éstas tienden a formar una masa esférica flotante. Tras aislar un único clon, se detectó que estas células tenían morfologías típicas de una intensa actividad secretora.

A continuación, se muestran imágenes de la línea en cultivo:



= **II- Medio de cultivo** = Los requerimientos para el mantenimiento de esta linea celular son un medio de cultivo adecuado y aditivos específicos, tal y como se muestra a continuación. Las células C7 crecen en DMEM 1x con un 10% de suero bovino fetal (FBS), 25 mM glucosa y 1% Penicilina/estreptomicina, y se incuban a 37 ºC con una concentración del 5% de CO2.

Además, para obtener células individuales del cultivo es recomendable utilizar tripsina en suspensión.

= III- Requerimientos para su mantenimiento. (medio de cultivo, aditivos específicos) =

Las células crecen en medio DMEM 1x con un 10% de suero de albumina fetal (FBS), 25mM de glucosa y 1% de antibióticos penicilina/estreptomicina que deben mantenerse a 37ºC con un 5% de CO2. Esta línea celular crecerá en una capa de cultivo, adjunto al tejido cultivado en placa. Las células se podrán distinguir cuando se encuentran entre un 70-90% confluentes en un radio de placa 1:4. Se aconseja tripsinización para aislar células del cultivo en suspensión (Lavar con PBS 1x, añadir tripsina-EDTA 1x (0,5 por 100mm placa)) a 37ºC de 1 a 5min. Seguidamente lavar la resuspensión en medio de crecimiento. Es importante realizar este último paso para evitar la muerte de las células. Este proceso tardará aproximadamente 2 días en placa hasta que se vuelvan confluentes otra vez, siempre y cuando el proceso se haya seguido correctamente.

= IV- Principales usos en investigación o clínica con justificación de sus ventajas frente a otros tipos celulares. =

Las células de la linea celular C7 se utilizan principalmente debido a que su tiempo de duplicación es de apenas 24h. Se trata de una línea heteroploide (106 cromosomas) y los antígenos del virus SV40 con el que son transfectadas son fácilmente observables en el núcleo mediante fluorescencia. Esta línea celular se caracteriza por una alta capacidad secretora, contienen un aparto de Golgi largo con abundantes micro vesículas.

Se trata de una línea celular muy interesante para el estudio de péptidos hormonales y sus funciones; también se utilizan en el campo de la electrofisiología puesto que estas células son capaces de expresar proteínas de membrana.

= V- Descubrimientos científicos más importantes obtenidos con esta línea celular. =

A partir de esta línea celular se ha conseguido estudiar los mecanismos implicados en la síntesis y expresión de péptidos hormonales o sus precursores, por ejemplo TRH y vasopresina. También se han utilizado en ensayos enzimáticos y para estudiar receptores biológicamente activos.

Su función principal se basa en desarrollar y validar nuevas dianas terapéuticas localizadas en el sistema nervioso central, relacionados con enfermedades o patologías, incluyendo la obesidad, el estrés, defectos metabólicos, etc.

=BIBLIOGRAFÍA= > >
 * Vitry, F., Camier, M., Czernichow, P., Benda, P., Cohen, P. and Tixier-Vidal, A. (1974). Establishment of a Clone of Mouse Hypothalamic Neurosecretory Cells Synthesizing Neurophysin and Vasopressin. Proceedings of the National Academy of Sciences, 71(9), pp.3575-3579.
 * Belsham, D., Cai, F., Cui, H., Smukler, S., Salapatek, A. and Shkreta, L. (2004). Generation of a Phenotypic Array of Hypothalamic Neuronal Cell Models to Study Complex Neuroendocrine Disorders. Endocrinology, 145(1), pp.393-400.
 * CELLutions Biosystems Inc (n.d.). Embryonic Mouse Hippocampal Cell Line Maintenance. Innovative biological tools for basics science, drug discovery & therapeutic development. [online] Burlington. Available at: https://www.cedarlanelabs.com/Products/Detail/CLU196?lob=Cellutions [Accessed 12 Feb. 2018].