BLR3A

**BRL 3A**
La línea celular BRL 3A se trata de células fibroblásticas provenientes de hígado de rata. El organismo donde se encuentra esta línea celular, es en Rattus norvegicus (rata buffalo). toc

**Breve recuerdo histórico **
Los descubridores de la BRL 3A fueron Hayden G. Coon y Mary C. Weiss en el año 1969 Sin embargo, fueron los investigadores SP Nissley y MM Rechler los que depositaron la línea celular por primera vez en el año 1977.

 

**Caracterización de la línea celular **
Esta línea celular fue aislada por clonación primaria. El medio libre de suero acondicionado por las células produce una actividad estimulante de la multiplicación (MSA).

 Células de la línea celular BLR 3A 24 horas después de la descongelación.

 __ Morfología __  El investigador Coon en 1968, usó una densidad incial muy baja de células. Además, también empleó varios subtipos de la misma línea celular. El número de cromosomas se obtuvieron al detener la divisón celular en metafase con colcemida (0,5 microg/mL), se eliminaron de la placa de cultivo con tripsina, se centrifugaron y se resuspendieron en cloruro de potasio hipotónico. Después, se fijaron las células fijaron con metanol y ácido acético en una proporción 3:1, para contabilizar el número de metafases. .  Se encuentran tres subtipos celulares: 3A, 3A2 y 61t:

 - Células 3A2: Tienen apariencia de rocosa con tamaños celulares bastante uniforme. Su dotación cromosómica es diploide con un rango de 41-42 cromosomas.  - Células 3A: Presentan tamaños muy diferentes. También tiene su dotación cromosómica es diploide con un rango de 41-42 cromosomas. <span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;"> - Células 61t: Tiene tamaños celulares muy variables. Este subtipo celular es subtetraploide, con 64 cromosomas.

<span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;"> De estos subtipos 3A2 y 3A provienen del mismo aislamiento original de hígado normal, mientras que 61t pertenece a un transformante espontáneo de otro aislado.

<span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;"> __<span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;"> Defectos genéticos __ <span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">La línea celular BRL 3A se originó a partir de clones de hígado de rata buffalo. Por lo que proviene de un hígado normal y no de un hígado infectado por un virus o tumoral, por este motivo, no tiene defectos a nivel genético.

__<span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;"> Defectos metabólicos __ <span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;"> Las nanopartículas anfipáticas de sílice inducen citotoxicidad y estrés oxidativo e las células, causando apoptosis mediado por p53, Bax/Bcl-2 y caspasas en las vias dependientes. Además, también se ha estudiado el cadmio, que causa daño oxidatico en las mitocondrias.; y un incremento de las caspasas, ocasionando apoptosis celular.

**<span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">Requerimientos para su mantenimiento **
<span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">El método para el cultivo de esta línea celular que se utilizó en 1977 fue el siguiente: Se eliminaron células confluentes de los matraces con tripsina al 0,075%, colagenasa 7 y / ml y suero de pollo al 2% en solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (sin Ca ++ o Mg ++) y se pasaron 1: 3 en medio F-12 de Ham modificado que contenía 5% de becerro fetal suero Cada 2-4 meses, las células 3A2 se descartaron y se descongeló un vial nuevo, ya que después de un cultivo prolongado, las células 3A2 comenzaron a presentar cambios morfológicos. Se demostró que las células 3ª, 3A2 y 61t están libres de micoplasma (microbiológicos Asociados, Bethesda, Maryland). Las células se pasaron 1:10 en medio de Ham's F-12 modificado que contenía 5% de FCS y se cultivaron hasta confluencia. El medio se reemplazó después con medio Eagle's (E) modificado de Temin que contenía 10% o 20% (v / v) de caldo de triptosa fosfato. Los medios se reemplazaron cada 3 o 4 días, y los medios recogidos se centrifugaron a 8000 rpm (rotor Sorvall, GSE) y los medios sobrenadantes se almacenaron a -20 ° C).

Actualmente, se utiliza el siguiente método para el cultivo de esta misma línea celular: Coon modificado Ham's F12 + 2mM Glutamina + 5% Fetal Bovine Serum (FBS) o Kaign's modificado Ham's F12 + 45mg / L ácido ascórbico + 18 mg / L Inositol + 5% Fetal Bovine Serum (FBS) + Glutamina 2 mM

Como rutina de subcultivo se utilizaría lo siguiente: Se dividieron cultivos subconfluentes (70-80%) 1: 3 a 1: 6, es decir, sembrando a 2-5x10,000 células / cm2 usando 0,25% de tripsina o tripsina / EDTA; 5% de CO2; 37°C.

Las células se pueden almacenar en nitrógeno líquido.

**<span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">Principales usos en investigación y en clínica **
<span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">Se han hecho varios estudios sobre la citotoxicidad en estas células, los resultados obtenidos son muy importantes dado que se pueden extrapolar a la salud humana. Aunque al ser experimentos in vitro, no pueden sustituir los otros estudios que se han realizado sobre animales, pero sí permiten ver el mecanismo y el potencial tóxico que podrían tener diferentes sustancias sobre las células, como, por ejemplo, nanopartículas. La finalidad de los experimentos de citotoxicidad en estas células es obtener conocimiento sobre que moléculas metal/óxido son más dañinas.

Otra aplicación, es que esta línea celular se ha usado como modelo para otras especies. Por ejemplo, al purificar proteínas de BRL 3A de ratón y humano, estas presentan fragmentos que también son expresados en E. coli y en otros mamíferos. Por lo que un medio de cultivo de esta línea celular se puede emplear para hacer estudios de diferentes organismos.

Una posible aplicación es el estudio de la capacidad regenerativa que pueden tener los tejidos y los órganos. Esta línea celular, al tener capacidad proliferativa y de diferenciación, se puede emplear parte de su estructura o macromoléculas para realizar estudios, como por ejemplo NARC-1.

La línea celular BRL 3A producen MSA: La actividad estimulante de la multiplicación (MSA) es una familia de polipéptidos estrechamente relacionados sintetizados por una línea particular de células (BRL 3A) derivado de hígado de rata normal Gracias a esta línea celular, se puede purificar el MSA, y emplear para realizar estudios sobre el factor de crecimiento como la insulina.

**<span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;"> Descubrimientos científicos más importantes **
<span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">El artículo del que se expone a continuación, es el más citado desde Scopus con 1253 citas. En el se mide el nivel de respuesta celular frente a diferentes nanopartículas, entre ellas Ag, Fe3O4, Al, MoO3, CdO, MnO2 y TiO2, para ver cual tiene una toxicidad mayor. Los resultados mostraron que la Ag, en bajas dosis (5-50 μg/mL), ocasiona una mala función mitocondrial, un aumento de perdida de la lactato deshidrogenasa por los poros de la membrana, malformaciones a nivel morfológico, niveles reducidos de glutatión (GSH) y un incremento de ROS, provocando estrés oxidativo. Sin embargo las otras nanoparticulas, precisan de dosis más elevadas (100-250 μg/mL)para causar daños.
 * //<span style="font-family: Arial,Helvetica,sans-serif;">Rattus norvegicus // ||

El segundo artículo más citado cuenta con 579 citas, el cual se explica a continuación. La reguladora de apoptosis neuronal convertasa 1 (NARC-1), ha permitido demostrar que su introducción en células de telencéfalo de cultivos embrionarios primarios en el día 13,5, ha potenciado el reclutamiento de células progenitoras neuronales indiferenciadas. Por lo que se deduce que NARC-1 está implicado en la diferenciación de células neuronales corticales. Esto ha sido posible debido a que las células de la línea celular BRL 3A, muestran una elevada expresión de NARC-1, permitiendo el estudio.

A partir de este punto, los siguientes artículos más citados tratan sobre el mismo tema, el factor de crecimiento celular, IGF-II. En uno de estos artículos se ha descubierto que el MSA, procedente de la purificación de la línea celular BRL 3A, es muy elevado durante el periodo fetal, pero después, de la vida extrauterina sus nieles van disminuyendo. Por ese motivo, se llega a la conclusión de que el MSA es un factor de crecimiento en rata fetal, y la somatomedina desempeña un papel en la estimulación de crecimiento durante la vida extrauterina en rata. Además, con el RNA, también se puede ver en qué tejidos la expresión de IGF-II es mayor y en qué estadios del ciclo biológico.

En relación con el artículo anterior, también se han hecho estudios sobre la presencia del factor de crecimiento en los diferentes tejidos a diferentes edades, tanto fetales como extrauterinas. Se ha observado que está presente en unos 11-13 tejidos diferente, con diversos niveles de expresión de IGF-II RNA. En los tejidos de hipotálamo y corteza cerebral, mostraron niveles bajos de expresión, sin embargo se mantuvieron hasta la edad adulta. No obstante, los tejidos de músculo y pulmón, fueron muy elevados en la vida fetal, pero fueron disminuyendo a los pocos días. Esto indica que el RNA IGF-II, presenta una relación con los primeros eventos de maduración de estos órganos.