3T3



1. Introducción. 2. Historia.
 * < ** Índice **

3. Caracterización de la línea. 4.Requerimientos para su mantenimiento. 5. Relevancia en la investigación. 6. Referencias. ||
 * Introducción **

La línea celular 3T3 es un importante cultivo de fibroblastos a partir de tejido embrionario de ratón albino suizo como organismo de origen. Para la obtención de los fibroblastos de embrión se debe sacrificar una hembra de ratón embarazada 13 o 14 dpc (dias pos coitum). Después de la extracción de los cuernos uterinos, los siguientes procedimientos para la obtención de los fibroblastos embrionarios se realizaran en condiciones asépticas en una campana de cultivo y con la utilización de material estéril y de un solo uso.

La denominación 3T3 proviene de la abreviatura del protocolo de incubación de estas células, que es una transferencia cada 3 días, con un inóculo de 3 x10E5. Esta línea celular se estabiliza después de 20-30 incubaciones, obteniéndose células poliploides que constan de 68 cromosomas, mientras que un ratón albino de laboratorio tiene 40 cromosomas.



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 * Historia **

La línea celular Nih 3T3 se aisló inicialmente en 1961 en el departamento de patología de la Escuela de Medicina de la Universidad de Nueva York por George Todaro, estudiante de la Universidad de Nueva York que se incorporó al equipo de investigación de esta junto a Howard Green, catedrático de la universidad. La investigación se publicó en el año 1969 por los autores Jainchill JL, Aaronson SA y Todaro GJ.

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 * Caracterización de la línea. **

Las células 3T3 son, en origen, fibroblastos, no obstante, su destino es convertirse en adipocitos. A falta de estímulos hormonales que provocarían la diferenciación a adipocitos, su morfología es la de un fibroblasto típico [1]. Se describen como células hipertriploides con 68 cromosomas en el 30% de los casos, a diferencia de las células normales de ratón que poseen 40. La tasa de células que presentan ploidías mayores es del 2,4%[3]. Recientemente se han obtenido estudios morfométricos de los nucléolos, donde se vió que la cantidad de nucléolos no depende de la cantidad de DNA nucleolar pero sí de la euploidía. Durante el proceso de aumento en el número de nucleólos en un núcleo, hay una disminución correspondiente en la cantidad de ADN por cada nucleólo, y hay a su vez, aumento en la suma de ADN nucleolar. Se ha visto que existe una relación significativa entre la suma de los perímetros nucleolar y el perímetro nuclear que aumenta linealmente cuando aumenta el número de nucléolos de un núcleo.[4]  En cultivo se calcula que producen una monocapa confluente de alrededor de 40.000células/cm^2. El tiempo de doblaje de la población es de 18 horas. Se suelen cultivar en flask de plástico, ya que en vidrio no presentan buen crecimiento. Una característica peculiar es que estas células tienen una elevada sensibilidad a la inhibición por contacto, además, son muy útiles en estudios de DNA (transformación y transfección). Se sabe que aparte de contaminaciones típicas, esta línea celular es sensible a contaminaciones por POLYOMAVIRUS y SV40 virus.[5]

Volver a inicio =**Requerimientos para su mantenimiento.**=

Para el mantenimiento en cultivo de esta línea celular, se van a necesitar distintos tipos de medios de cultivo con diferentes aditivos o suplementos en función de lo que se quiera hacer con las células, es decir, se usará un medio para expandir los pre adipocitos, otro para que las células se diferencien y un último para mantener los adipocitos en cultivo.

El __medio para la expansión__ de los pre adipocitos está compuesto por un 90% de DMEM (modificación de Dulbecco del medio mínimo de Eagle) y un 10% de suero de ternera bovino (Bovine Calf Serum).

El __medio de diferenciación__ debe contener un 90% de DMEM, 10% de suero bovino fetal (FBS), dexametasona 1 µM, 3-isobutil-1-metilxantina 0,5 mM (IBMX) y 1 µg/mL de insulina.

Por último,el __medio de mantenimiento__ de los adipocitos está compuesto por un 90% de DMEM, 10% de FBS y 1 µg/mL de insulina. [6]

Se ha comprobado que el tratamiento prolongado de los pre adipocitos en IBMX (3-isobutil-1-metilxantina) mejora la eficiencia de diferenciación de estas células tal como se indica en la bibliografía consultada [7]. Por ello, IBMX, es un aditivo necesario que se añade en el medio de diferenciación de las células 3T3, que ayuda a la diferenciación de las mismas **. **

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**Relevancia en la investigación**

PRINCIPALES USOS EN INVESTIGACIÓN

Esta línea celular es utilizada para estudios sobre obesidad gracias a la capacidad inducible de transformación en adipocitos, y su gran facilidad para incorporar e integrar DNA exógeno hizo de ellas el sistema modelo adecuado en experimentos de transfección, lo que permitio el descubrimiento y el clonado de muchos oncogenes.[12]

PRINCIPALES DESCUBRIMIENTOS DE LA LINEA CELULAR

Junto con T24, 3T3 ha sido la línea celular que a principio de los 80 se decubrieron los oncogenes humanos mediante transfección. También se utilizó para desarrollar una técnica que consiste en una inmortalización reversible de las células de mamíferos mediante transfección de genes víricos.[11]

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 * Referencias **

[ 1] Yongjie Hua, Shanshan Ke, Yao Wang, David M. Irwin, Shuyi Zhang, Zhe Wang, Prolonged treatment with 3-isobutyl-1-methylxanthine improves the efficiency of differentiating 3T3-L1 cells into adipocytes, Analytical Biochemistry, Volume 507, 15 August 2016, Pages 18-20, ISSN 0003-2697.

[2] Fenggang Yu, Wen-son Hsieh, Fredrik Petersson, Henry Yang, Yingying Li, Chunwei Li, Soon Wah Low, Jing Liu, Yan Yan, De-Yun Wang, Kwok Seng Loh, Malignant cells derived from 3T3 fibroblast feeder layer in cell culture for nasopharyngeal carcinoma, Experimental Cell Research, Volume 322, Issue 1, 10 March 2014, Pages 193-201, ISSN 0014-4827.

[3] []

[4] Z.A. Karalyan, N.G. Djaghatspanyan, M.H. Gasparyan, L.A. Hakobyan, L.O. Abroyan, Y.H. Magakyan, Z.R. Ter-Pogossyan, L.A. Kamalyan, V.Y. Avagyan, E.M. Karalova, New indices in morphometry of nuclear structure in the NIH 3T3 cell line, Cell Biology International, Volume 27, Issue 10, 2003, Pages 809-814, ISSN 1065-6995, http://dx.doi.org/10.1016/S1065-6995(03)00158-6.

[5] http://bcrj.org.br/catalogo/cell/?celula=3t3-swiss-albino-fibroblast-mouse.

[6] Chemically induced differentiation of ATCC® CL-173™ (3T3-L1) using single-component commercially available reagents, Technical Bulletin No. 9

[7] Hua, Y., Ke, S., Wang, Y., Irwin, D., Zhang, S. and Wang, Z. (2016). Prolonged treatment with 3-isobutyl-1-methylxanthine improves the efficiency of differentiating 3T3-L1 cells into adipocytes. Analytical Biochemistry, 507, pp.18-20.

[8] Todaro G.J. Quantitative studies of the growth of embryo cells in culture and their development into established lines. Department of Pathology, New York University School of Medicine, New York. 1963.

[9] Jozefczuk, J., Drews, K., Adjaye, J. Preparation of Mouse Embryonic Fibroblast Cells Suitable for Culturing Human Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells. J. Vis. Exp. (64), e3854, doi:10.3791/3854. 2012.

[10] Mukhopadhyay R. Generating the NIH 3T3 cell line, the oncogene hypothesis and horses. ASBMBTODAY. 14, (1). 2015. Recovered from http://www.asbmb.org/asbmbtoday/201501/Generations/3T3/

[11] Karen A. Westerman, Philippe Leboulch. Reversible immortalization of mammalian cells mediated by retroviral transfer and site-specific recombination. Cell Biology. 1996.

[12] Alberto Muñoz. Cáncer: genes y nuevas terapias. Editorial Hélice. 2004. Volver a inicio